| 设为主页 | 保存桌面 | 手机版 | 二维码
普通会员

广州慧晶生物科技有限公司

蛋白质组学技术服务,分子生物学技术服务,细胞生物学技术服务

新闻中心
产品分类
联系方式
  • 联系人:刘先生
  • 电话:4006991663
  • 邮件:servive@fitgene.com
  • 传真:020-32053431
您当前的位置:首页 » 供应产品 » Western blot技术服务
Western blot技术服务
点击图片查看原图
产品: 浏览次数:1421Western blot技术服务 
规格: Western blot技术服务
单价: 面议
最小起订量:
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2019-05-10 10:20
  询价
详细信息


一、Western blot概述
    Western Blot采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物(NC膜,PVDF膜等)上后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与其对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的二抗体起反应,经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。
由于Western blot检测技术具有简便,快捷等特点,所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。
 
二、技术服务服务内容
 1、蛋白质抽提与定量;
 2、Western blot
 3、图片分析;
 4、Western blot实验报告提交。
 
四、送样须知,为了保证Western blot实验能顺利进行,样品寄送需满足以下要求
    顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等;一抗(如果公司抗体库里没有)。
    运输要求:干冰或液氮包装寄送,广州本地客户可上门收样。
    注:样本应避免各类污染和反复冻融。
 
五、实验报告内容
 1、Western blot蛋白质浓度及电泳上样量;
 2、原始胶片和电子图片、图片分析结果;
 3、Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
 
六、实验案例


 
七、服务周期及收费标准: 欢迎登陆  www.fitgene.com   服务热线 400-699-1663

八、服务质量承诺:利用内参精确定量,并提供清晰、客观的western结果。
 
 
附:Western blot 实验步骤
 1、Western blot蛋白质提取:根据实验目的的不同选择不同的裂解液,如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液,同时根据蛋白质提取组分的不同选择不同的方法,如提取核蛋白,细胞质蛋白,膜蛋白等。

 2、蛋白定量,根据蛋白质的提取条件不同,可采取不同的定量方法,如bradford法、BCA法等。

 3、电泳,依据需要检测蛋白的分子量选取分离胶的浓度,分别配置分离胶和积成胶,凝胶凝固后进行蛋白质上样和电泳。

 4、转膜,可采取半干法和湿法转移,当采取半干法转膜时需防止短路:从下到上的顺序:滤纸/PVDF膜/凝胶/滤纸/阴极(bio-rad转膜仪)。

 5、封闭:5%脱脂奶粉或5% BSA封闭过夜或室温1小时,孵育时间可根据实验需要进行改变。

 6、一抗孵育,5%脱脂奶粉稀释一抗到合适的浓度,与膜室温孵育1小时4度过夜,孵育时间可参考抗体说明书,并加以优化,一抗孵育后TBST洗膜3次,每次5分钟。

 7、 二抗孵育,5%脱脂奶粉稀释二抗到合适的浓度,与膜室温孵育1小时,TBST洗膜3次,每次5分钟。

 8、显影(ECL法):将A、B两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,置于压片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒进行曝光,曝光一定时间后取出胶片,浸入显影液中显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定Marker,扫描胶片和Western blot 图片分析。

询价单
0条  相关评论